Фармацевтикалық судағы эндотоксинді анықтауға арналған ерітінді
Фармацевтикалық судағы эндотоксинді анықтауға арналған ерітінді
БЕТМАТШешімнің негізі және мақсаттары
| Фармацевтикалық судың түрі | Эндотоксинге қойылатын шектеу талабы | Қолданылатын фармакопеялық стандарттар (мысалдар) | Негізгі қолдану сценарийлері |
| Тазартылған су | Міндетті эндотоксин шегі жоқ (тек микробтық шектеу талаптарына сәйкес келуі керек) | USP жалпы тараулары Фармацевтикалық мақсаттарға арналған су | Ішке қабылдауға арналған препараттарды және сыртқы препараттарды дайындау; Стерильді емес БҚП өндірісі |
| Инъекцияға арналған су (WFI) | ≤0,25 ЕС/мл | USP жалпы тараулары Фармацевтикалық мақсаттарға арналған су | Инъекциялар мен көз тамшыларын дайындау; Стерильді БҚС-тарды тазарту |
| Инъекцияға арналған стерильді су | ≤0,25 ЕС/мл | USP жалпы тараулары Фармацевтикалық су | Инъекцияға арналған стерильді ұнтақтарды еріту; Инъекцияларды сұйылту |
| Гемодиализ суы | ≤0,25EU/мл | ISO 23500-3: 2024 Гемодиализге және онымен байланысты терапияға арналған су | Гемодиализ және гемофильтрациялық емдеу |
Анықтау әдістерін таңдау
Қазіргі уақытта фармакопея мойындаған эндотоксинді анықтау әдістері негізінен «Гель-ұю әдісі» және «Фотометриялық әдіс» (турбидиметриялық әдіс пен хромогендік әдісті қоса алғанда) болып бөлінеді. Әрбір әдістің өзіндік артықшылықтары бар, және таңдау анықтау қажеттіліктеріне (мысалы, сезімталдық, автоматтандыру дәрежесі, үлгі сипаттамалары және т.б.) негізделуі керек:
3.1 Гель-ұю әдісі (Лимулус амебоцит лизатының гель-ұю әдісі)
3.1.1 Қағидат
Лимулус амебоцит лизатының (LAL) эндотоксинмен әрекеттескеннен кейін гель түзетіндігіне негізделген: Эндотоксин LAL-да С факторымен іске қосылатын серин протеазасының каталитикалық жолын белсендіреді, проколяция ферментін ұю ферментіне айналдырады, бұл өз кезегінде коагулогеннің коагулинге айналуын катализдейді және ерімейтін гель түзеді. Үлгі мен LAL арасындағы реакциядан кейін гель түзілгенін бақылау арқылы эндотоксин мөлшерінің шектен асып кеткенін анықтайды.
3.1.2 Артықшылықтары және қолданылатын сценарийлер
- Артықшылықтары: 1 Қарапайым пайдалану, күрделі құралдарды қажет етпейді және арзан.
- Қолданылатын сценарийлер: ① Эндотоксин шегін үнемі тексеру (мысалы, инъекцияға арналған судың сәйкестігін тексеру); ② Сынама көлемі аз және анықтау жиілігі төмен зертханалар.
3.1.3 Шектеулер
- Тек сапалық немесе жартылай сандық (дәл мәндерді бере алмайды, тек «білікті/білікті емес» деп анықтайды);
- Ұзақ анықтау уақыты (әдетте 37±1°C температурада 60±2 минут инкубациялауды қажет етеді);
- Анықтау нәтижелерін бағалау үшін гельдің түзілуіне сүйенеді, бұл бастапқы анықтау деректерін сақтауға ықпал етпейді.
3.2 Фотометриялық әдіс
3.2.1 Қағидат
Ол сондай-ақ LAL мен эндотоксин арасындағы реакцияға сүйенеді, бірақ реакция кезінде «лайлылықтың өзгеруін» (турбидиметриялық әдіс) немесе «түзілген хромогендік өнім мөлшерін» (хромогендік әдіс) өлшеу арқылы эндотоксин мөлшерін сандық анықтауды жүзеге асырады:
- Турбидиметриялық әдіс: Эндотоксин мен LAL арасындағы реакцияның гель түзілу процесі кезінде ерітіндінің лайлылығы біртіндеп артады. Эндотоксин мөлшері белгілі бір толқын ұзындығында (мысалы, 340 нм) сіңірілудің өзгеру жылдамдығын немесе соңғы нүктенің сіңірілуін өлшеу және оны стандартты қисықпен салыстыру арқылы есептеледі.
- Хромогендік әдіс: LAL құрамында эндотоксинмен әрекеттесетін хромогендік субстрат бар. Эндотоксин коагулазаны белсендіргеннен кейін, хромогендік субстрат боялған өнімді бөліп шығару үшін гидролизденеді. Эндотоксин концентрациясы боялған өнімнің сіңірілуін өлшеу арқылы есептеледі (мысалы, 405 нм).
3.2.2 Артықшылықтары және қолданылатын сценарийлер
- Артықшылықтары: ① Сандық анықтау мүмкін, бұл үрдістерді талдауды жеңілдетеді; ② Жоғары анықтау тиімділігі (15-30 минут ішінде аяқталуы мүмкін); ③ Автоматтандырудың жоғары дәрежесі (топтық анықтауды қамтамасыз етеді); ④ Кедергілерге қарсы күшті қабілет.
- Қолданылатын сценарийлер: ① Инъекциялық жүйелерге арналған судың «трендтерін бақылау» (мысалы, жүйенің ластану қаупі туралы ескерту үшін эндотоксин құрамының өзгеруін үздіксіз бақылау); ② Үлкен сынама көлемі және жоғары анықтау жиілігі бар фармацевтикалық зауыттар.
3.2.3 Шектеулер
- Құралдың жоғары құны (эндотоксинді анықтауға арналған жабдықты қажет етеді).
3.3 Әдісті таңдау бойынша ұсыныстар
| Анықтау талабы | Қалаған әдіс | Ескертпелер |
| Фармакопеялық сәйкестік шегін сынау | Гель-ұйытылған әдіс | Ресми әдіс және нәтижелерді тіркеу және аудит үшін тікелей пайдалануға болады |
| Сандық талдау және үрдістерді бақылау | Фотометриялық әдіс | Жүйенің жұмыс тұрақтылығын бақылауды жеңілдетеді |
| Жоғары сезімталдықтағы эндотоксинді анықтау (мысалы, гемодиализ суы) | Хромогендік әдіс | Жоғары сезімталдық (ең аз анықтау шегі 0,001 EU/мл жетуі мүмкін) |
| Топтық үлгіні анықтау | Фотометриялық әдіс | Топтық және автоматтандырылған анықтауға ықпал етеді |
Ерекше өзгешеліктері
-
4.1 Анықтау алдындағы дайындық
4.1.1 Үлгілерді жинау және өңдеу
- Сынама алу контейнерлері: Эндотоксинсіз шыны бөтелкелерді немесе пробиркаларды пайдаланыңыз (эндотоксинді кетіру үшін ≥250°C температурада 30 минуттан астам құрғақ жылумен стерилизациялау керек).
- Сынама алу әдістері: ① Тазартылған су/инъекцияға арналған су: Сынама алу клапанын ашыңыз, суды 5-10 минут ағызыңыз (құбырды шаю үшін), содан кейін асептикалық жағдайда сынамаларды жинаңыз; ② Жүйенің негізгі нүктелерінен сынама алу: Су жүйесінің толық жабылуын қамтамасыз ету үшін сақтау ыдысының шығысын, тарату құбырының соңын және сүзгінің алдыңғы және артқы жағын қосыңыз.
- Үлгіні сақтау: Жинағаннан кейін және толық анықталғаннан кейін 24 сағат ішінде 4°C температурада сақтаңыз; ұзақ мерзімді сақтау қажет болса, -20°C температурада мұздатыңыз, бірақ ерігеннен кейін эндотоксиннің біркелкі таралуын болдырмау үшін үлгіні толығымен араластыру керек.4.1.2 Реагент пен құралды дайындау
- Реагенттер: 1 KTA эндотоксин талдау жинағы (кинетикалық турбидиметриялық әдіс, 300 сынақ/жинақ), каталог нөмірі: KTA300TA.
- Құралдар: 1. Кинетикалық инкубациялық микропластина оқу құрылғысы ELx808IUBET, каталог нөмірі: 808IUBET; 2. Эндотоксинсіз шыны сұйылту түтікшелері; 3. Эндотоксинсіз ұштары бар пипеткалар; 4. Эндотоксинсіз 96-ұңғылықты микропластиналар; 5. Құйынды араластырғыш; 6. Сынақ түтігінің сөресі.
- Эндотоксонсыз өңдеу: Үлгілермен және реагенттермен жанасатын барлық ыдыс-аяқтар (мысалы, сынақ түтіктері, пипеткалар және пипетка ұштары) ≥250°C температурада 30 минуттан астам құрғақ жылумен стерилизациялануы керек немесе эндотоксинсіз екені расталған бір рет қолданылатын пирогенсіз ыдыстарды пайдалануы керек. -
4.2 Анықтау процедуралары
4.2.1 Стандартты қисықты дайындау
1. Эндотоксин стандартын жинақпен бірге берілген LAL реагент суымен бірнеше концентрацияға дейін сұйылтыңыз: 10, 1, 0,1 және 0,01 EU/мл.
2. Эндотоксинсіз 96 ұяшықты реакция пластинасын алыңыз, әр ұяшыққа 100 мкл тізбекті концентрация стандартын қосыңыз және әр концентрация үшін 3 параллель ұяшық орнатыңыз.
3. Әрбір ұңғымаға 100 мкл LAL реагентін қосыңыз, пластинаны жаппай ақырын араластырыңыз және оны 37°C температурада инкубациялау үшін ELx808IUBET кинетикалық инкубациялық микропластина оқу құралына салыңыз.
4. 340 нм-дегі оптикалық тығыздықты (ОТ) 60 минут бойы әр 30 секунд сайын өлшеңіз.
5. Формуланы пайдаланып, стандартты қисықты құрыңыз: log10 Y = B(log10 X) + A (мұндағы Y = реакция уақыты (басталу уақыты), X = эндотоксин концентрациясы). Корреляция коэффициенті (R²) ≥0,98 болуы керек.4.2.2 Үлгіні анықтау
1. Реакция пластинасының ұяшықтарына 100 мкл үлгі қосыңыз (әр үлгі үшін 2 параллель ұяшық және 2 бос бақылау ұяшығын орнатыңыз; әрбір бос бақылау ұяшығына 100 мкл LAL реагент суын қосыңыз).
2. Үлгілердің сіңірілуін динамикалық түрде өлшеу үшін жоғарыдағы «Стандартты қисық сызықты дайындау» бөліміндегі 3 және 4 қадамдарды қайталаңыз.
3. Стандартты қисыққа сүйене отырып, үлгінің эндотоксин концентрациясын есептеңіз.4.2.3 Кедергі сынағы (негізгі тексеру қадамы)
Фармацевтикалық судың құрамында LAL реакциясына кедергі келтіретін заттар (мысалы, қалдық жуғыш заттар және металл иондары) болуы мүмкін болғандықтан, әрбір үлгі партиясы үшін немесе жүйені дезинфекциялаудан кейін кедергі сынағы жүргізілуі керек:
1. Үлгіні екі топқа бөліңіз: бір топ эндотоксиннің белгілі стандартты концентрациясымен спицаланған (спицаланған топ), ал екінші топ спицаланбаған (үлгі тобы).
2. Екі топтың эндотоксин концентрациясын бөлек анықтаңыз және «қалпына келу жылдамдығын» есептеңіз (қалпына келу жылдамдығы = [(Шиканды топтың концентрациясы - Үлгі тобының концентрациясы) / Шиканды концентрация] × 100%).
3. 50%-200% аралығындағы қалпына келтіру жылдамдығы кедергінің жоқтығын білдіреді; егер ол осы диапазоннан асып кетсе, кедергіні үлгіні сұйылту, рН мәнін (6,0-8,0 дейін) реттеу немесе кедергі ингибиторын қолдану арқылы жою керек. -
4.3 Нәтижелерді бағалау және есеп беру
1. Нәтижені бағалау: ① Егер үлгідегі эндотоксин концентрациясы сәйкес су сапасының шегінен ≤ болса (мысалы, инъекцияға арналған су үшін ≤0,25 EU/мл) және кедергі сынағы білікті болса, үлгі «білікті» деп бағаланады; ② Егер концентрация шектен асып кетсе немесе кедергі сынағы білікті емес болса, қайта сынама алу және анықтау қажет. Егер нәтиже әлі де білікті болмаса, ауытқуды зерттеуді бастау керек.
2. Есептің мазмұны: Есептің қадағаланатындығын қамтамасыз ету үшін үлгі нөмірін, сынама алу нүктесін, анықтау күнін, анықтау әдісін, реагент партиясының нөмірін, стандартты қисық параметрлерін, үлгі концентрациясын, интерференциялық сынақ нәтижелерін, қорытынды қорытындысын және детектордың қолын қамтуы тиіс.
-
5.1 Күнделікті сапаны бақылау шаралары
011. Оң бақылау және теріс бақылау: Әрбір анықтау партиясы үшін реагенттердің тиімділігін және жұмыс кезінде ластанудың болмауын қамтамасыз ету үшін оң бақылау (эндотоксиннің белгілі концентрациясы стандарты) және теріс бақылау (эндотоксинсіз су) орнатылуы керек.
2. Параллель үлгілердің сәйкестігі: Бір үлгі үшін параллель ұңғымаларды анықтау нәтижелерінің салыстырмалы ауытқуы ≤15% болуы керек; әйтпесе қайта анықтау қажет.
3. Реагент сапасын тексеру: Сатып алынған LAL реагенттерінің әрбір жаңа партиясы үшін нұсқаулық талаптарына сәйкестігін қамтамасыз ету үшін стандартты қисықтың жарамдылығын тексеру жүргізілуі керек.
-
5.2 Фармацевтикалық су жүйелерінің эндотоксинді тексеруі
021. Орнату біліктілігі (IQ): Материалдардың (316L тот баспайтын болат немесе политетрафторэтилен болуы керек) және жүйелік құбырларды, сақтау цистерналарын және сүзгілерді орнату (мысалы, эндотоксинді ұстап тұра алатын 0,22 мкм стерильді сүзгі мембраналары) жобалау талаптарына сәйкес келетінін тексеріңіз.
2. Пайдалану біліктілігі (OQ): Жүйенің әрбір іріктеу нүктесіндегі эндотоксин мөлшерінің қалыпты жұмыс параметрлері (мысалы, температура, ағын жылдамдығы және қысым) кезінде стандартқа сәйкес келетінін тексеріңіз.
3. Өнімділік біліктілігі (PQ): Жүйенің әрбір іріктеу нүктесінде эндотоксинді 3 партия бойы үздіксіз анықтаңыз; жүйенің тұрақты және сенімді екенін тек барлық нәтижелер шекті талаптарға сай болған жағдайда ғана растауға болады.
4. Қайта тексеру: Қайта тексеру жүйеге күрделі жөндеу жұмыстары жүргізілгенде (мысалы, құбырды ауыстыру және сүзгіні ауыстыру), технологиялық процестер өзгергенде немесе тұрақты аралықтарда (әдетте жылына бір рет) жүргізілуі тиіс.
| Жиі кездесетін мәселе | Мүмкін болатын себеп | Шешім |
| Гель-ұйынды әдісінде жалған теріс нәтиже (гель түзілуі керек болған кезде гель түзілмейді) | Үлгінің рН мәні тым жоғары/тым төмен (6,0-8,0 аралығында ауытқиды); LAL инактивациясы | Үлгінің рН мәнін бейтарапқа реттеңіз; жарамдылық мерзімі ішінде LAL мәнін ауыстырыңыз |
| Фотометриялық әдістегі стандартты қисықтың нашар сызықтылығы | Стандарттың біркелкі емес сұйылуы; инкубация температурасының ауытқуы | Градиентті сұйылтуды қатаң қадағалаңыз және толық араластырыңыз; детектордың тұрақты температурасын қамтамасыз етіңіз |
| Біліктілігі жоқ үлгіні қалпына келтіру деңгейі | Үлгілерде кедергі келтіретін заттар (мысалы, ауыр металдар, беттік белсенді заттар) бар | Үлгіні сұйылтыңыз (кедергі келтіретін заттардың концентрациясын азайтыңыз); құрамында кедергі ингибиторы бар LAL қолданыңыз |
| Жүйеде эндотоксиннің кенеттен асып кетуі | Құбырдың ластануы (мысалы, биоүлбірдің пайда болуы); сүзгінің істен шығуы | Жүйеде CIP (орнында тазалау) + SIP (орнында зарарсыздандыру) әрекеттерін орындаңыз; сүзгіні ауыстырыңыз |
Схеманы оңтайландыру бойынша ұсыныстар
- Әдісті валидациялауды кеңейту
Қоршаған ортаны қорғау және тұрақты даму үрдістеріне сәйкес дәстүрлі LAL әдісіне қосымша ретінде «Рекомбинантты С факторы әдісін» (таға тәрізді шаян ресурстарына тәуелділіктен аулақ болатын және жоғары ерекшелігі бар рекомбинантты прокоагулянтқа негізделген rFC әдісі) біріктіріңіз.
- Персоналды оқыту
Анықтау операцияларының стандартталуы мен дәлдігін қамтамасыз ету үшін детекторларға фармакопеялық стандарттар, пайдалану сипаттамалары және құралдарға техникалық қызмет көрсету бойынша үнемі оқыту жүргізу.
Бұл шешім бүкіл анықтау процесін және ықтимал мәселелерді қамтиды. Пайдаланушылар оны фармацевтикалық зауыттың нақты көлеміне, анықтау қажеттіліктеріне және қолданыстағы жабдықтарға сәйкес реттей алады. Шешім фармакопеялық стандарттарға сәйкес келеді және фармацевтикалық су жүйелерінің нақты қолдану сценарийлерін біріктіреді. Ғылыми әдісті таңдау, стандартталған жұмыс процедуралары және қатаң сапаны бақылау арқылы эндотоксинді анықтаудың сәйкестігі мен дәлдігіне тиімді қол жеткізе алады, бұл фармацевтикалық өндірістің қауіпсіздігіне сенімді кепілдік береді.